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企业动态

酶标仪在钙离子通道检测方面主要有两种方式
发布时间:2016-10-27   点击次数:1131次
酶标仪应用广泛,酶标仪主要功能模块荧光与化学发光模块可实现对细胞中钙离子通道的检测。
生物膜离子通道是各种无机离子跨膜运动被动运输的通路。生物膜上无机离子出入细胞的方式有被动运输(顺离子浓度)与主动运输(逆离子浓度)。其中被动运输的通路被称为离子通道。Ca2+通道广泛存在于各种生物组织的细胞膜中。药物对Ca2+通道的作用可分为:①通道阻断或抑制剂,可分为苯烷基胺类(如异博定、甲基异博定D600)、苯硫氮?类、双氢吡啶类等类型。②通道激活剂,一些双氢吡啶化合物如BayK8644等药物可活化Ca2+通道。钙离子通道定义:它是一种跨越细胞膜的结构,它严格控制着钙离子进入细胞的过程。由于钙离子信号与很多重要生理功能相关,例如心脏收缩、基因转录等,因此调节钙离子进入细胞的精确反馈机制就至关重要。
酶标仪用于检测钙离子通路主要通过两种方式:1,荧光法。化合物与细胞膜上离子通道结合后,改变离子通道状态,通道打开,钙离子进入细胞。进入细胞后与细胞内钙离子荧光指示剂结合,发出荧光后酶标仪捕获,荧光强度与进入细胞的钙离子含量成正比。荧光指示剂多用FLuo3,Fluo3-AM是一种可以乙酰甲酯衍生物,可以穿透细胞膜进入细胞,进入细胞后被细胞内的酯酶剪切成FLuo3并滞留在细胞内,钙离子进入细胞后与之结合,会发出较强的荧光。
2,发光法。水母发光蛋白复合物(Aequorin)由22kDa的水母蛋白(Apoaequorin protein)、分子氧和底物腔肠素组成。只有当钙离子(Ca2+)与该复合物结合后,腔肠素才能被氧化生成高能量产物Coelenteramide,同时释放出CO2和蓝色荧光(——466 nm)。正是此Ca2+依赖性的反应过程(见图1),使得腔肠素非常适用于监测活细胞内钙离子水平。与常规的荧光钙离子指示剂相比,其主要具有以下几个优点,1)能检测较大范围的钙浓度 – 从0.1 μM至 >100μM;2)样品无自体荧光,背景荧光低于使用荧光钙离子指示剂;虽然信号比使用荧光钙离子指示剂弱,但是通过成像仪器可以得到更高的信噪比,因此具有更高的灵敏度。3)水母发光蛋白复合体能够稳定维持在细胞内,使其能够进行数小时至数天的钙离子监测。

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